ProAqa Excel親和色譜柱專門適用于細胞系篩選或上游生物工藝優(yōu)化和質量控制過程中快速準確的單克隆抗體定量。填料是由平均粒徑20 µm、孔徑1000-2000 Å的均一的PS/DVB填料顆粒與重組蛋白A配體偶聯而成，該配體能與除IgG3以外的免疫球蛋白以及含Fc的融合蛋白結合。填料具有機械強度，可以承受高流速和高壓操作。
| ProAqa Excel | 參數 |
|---|---|
| 填料基質(粒徑, 孔徑) | 均一的 PS/DVB(20 µm, 1000-2000 Å) |
| 固定配體 | 重組蛋白A |
| 色譜柱尺寸（內徑×長度） | 2.1 mm x 30 mm |
| 色譜柱材質 | 不銹鋼 |
| 最大壓力 | 200 bar |
| pH 范圍 | 1.2-13.0 |
| 最大流速 | 5 mL/min |
| 推薦流速 | 1-3 mL/min |
| CIP | 0.1 M NaOH |
| 結合緩沖液 pH | 6.6-7.5 |
| 壽命 | >2000次進樣 |
| 標準進樣量 | 10 µL |
| IgG 檢測濃度 | 0.029-40 mg/mL* |
| LOD | 0.29 µg |
(*UV 280 nm: 0.029 -7.500 mg/mL, UV 300 nm: 0.117-40.000 mg/mL)
均一的Sepax填料顆粒(20 µm) D90/D10<1.3
要使用高純度的緩沖液，緩沖液使用前需要排氣和過濾（0.22 μm）。進樣前，請務必做空白對照，并仔細檢查峰積分結果中是否存在噪音或基線繪制不正確。為了降低結合緩沖液和洗脫緩沖液轉變時引起的基線波動，建議使用：
（a）50 mM磷酸鹽（pH 7.0），0.15 M NaCl作為起始/沖洗溶液。
（b）100 mM磷酸鈉，0.15 M NaCl（pH 2.5）或100 mM甘氨酸，0.15 M NaCl（pH 2.5）作為洗脫緩沖液。
這些是對信號噪音最小化最有效的洗滌/洗脫液。鹽酸（HCl）能使抗體變性，所以洗脫產品如果需要生物活性的話，不建議添加HCl。
（a）大多數情況下，可以使用簡單的緩沖液，例如10-100 mM的磷酸鹽或Tris。
?。╞）結合/洗脫緩沖液的pH范圍為6.0-7.5，但是請注意，在較高的pH范圍下結合力最強。
?。╟）添加一些鹽（0.1-0.2 M NaCl或KCl）抑制蛋白間相互作用的非特異性吸附。
對于分析應用，使用25-100 mM磷酸鹽（pH 2.0-3.5），含或不含高達150 mM的NaCl。可以使用的其他洗脫緩沖液成分包括磷酸鈉、鹽酸、甘氨酸、檸檬酸鹽、醋酸鹽以及其他含低pH成分的緩沖液。
由于抗體的結合/洗脫行為因種類和亞類而異，因此應憑經驗確定最佳洗脫條件。
為了保證高效結合和避免柱子濾片堵塞，樣品一般按以下方式準備：
?。╝）溶解或交換樣品到起始/洗滌緩沖液，這對于大份樣品（大于25%柱體積）尤其重要。
?。╞）進樣前離心或用0.22 μm濾膜過濾樣品。
（c）熱處理血清樣品（56℃加熱30 min）去除殘留的纖維蛋白原，它們會在多次運行中阻塞色譜柱。
（d）盡可能對樣品脫脂，因為脂質會引起不可逆的結垢。
為保證高效結合及避免填料和色譜柱污染，需要確認上樣量：
?。╝） 圖2和圖3顯示了ProAqa Excel色譜柱的動態(tài)測試范圍。
?。╞） 其他抗體的結合能力取決于抗體來源和亞類。
?。╟） 需要優(yōu)化結合和洗脫條件并用樣品確認，以確保達到最夠的結合平衡和完全洗脫。
?。╠） 在分析應用中，最小和最大載量應該通過標準曲線的線性確定（如圖2所示，對于樣品濃度在0.029-7.500 mg/mL的常用定量分析，可以將檢測波長設置為280 nm。如圖3所示，如果樣品濃度較高（高達40 mg/mL），波長可設置為300 nm。在該分析應用中，建議使用雙波長檢測（280 nm和300 nm）。
| 規(guī)格 內徑×長度 （mm×mm） | 材質 | 柱體積（mL） | 訂貨號 |
|---|---|---|---|
| 標準規(guī)格 | |||
| 2.1×30 | 不銹鋼 | 0.1 | 271120980-2103S |
| 定制規(guī)格 | |||
| 2.1×50 | 不銹鋼 | 0.17 | 271120980-2105S |
| 4.6×35 | 不銹鋼 | 0.58 | 271120980-4603S |
| 4.6×50 | 不銹鋼 | 0.83 | 271120980-4605S |
| 4.6×100 | 不銹鋼 | 1.66 | 271120980-4610S |
