Proteomix

• 單分散型填料顆粒
• 寬的pH范圍: 2-12
• 優(yōu)異的分離效率、選擇性和分離能力
• 耐受高壓：10、5、 3 &1.7 μm分別可以耐受4000, 6000, 8000 & 12000 psi
• 對(duì)不同生物物種的差異性分析具有高的分辨率
• 1.7 & 3 μm粒徑的填料最適合用于蛋白質(zhì)組學(xué)中的全蛋白分離和分析
• 適合多肽、碳水化合物、多糖、蛋白質(zhì)、多聚核苷酸、細(xì)胞裂解液和多維色譜分離

　　Proteomix離子交換樹(shù)脂采用了賽分公司獨(dú)創(chuàng)的合成技術(shù)，所得到的無(wú)孔樹(shù)脂具有高的離子交換容量。填料為剛性、球形、高交聯(lián)度的聚苯乙烯/二乙烯苯(PS/DVB)顆粒。無(wú)孔填料的粒徑有1、1.8、3、5和10 μm等幾種規(guī)格。PS/DVB樹(shù)脂表面鍵合有一層高度親水的納米厚度的中性聚合物薄膜。疏水的PS/DVB樹(shù)脂表面完全被這種親水材料覆蓋，從而消除了PS/DVB對(duì)生物分子的不可逆吸附，保證了其具有很高的分離效率和生物樣品回收率。運(yùn)用賽分獨(dú)有的化學(xué)鍵合技術(shù)，可將離子交換官能基團(tuán)致密均勻地鍵合在親水層的表面，獲得高容量的離子交換層。無(wú)孔Proteomix離子交換樹(shù)脂的獨(dú)特之處在于它綜合了高容量和無(wú)孔樹(shù)脂所固有的高分離效率兩個(gè)優(yōu)點(diǎn)。Proteomix離子交換樹(shù)脂可用于蛋白、寡核苷酸、多肽、聚多糖、細(xì)胞溶解液、納米顆粒和納米管等的分離。

Proteomix SCX、WCX、SAX和WAX填料的化學(xué)組成

　　離子交換固定相有強(qiáng)陽(yáng)離子交換（SCX）、弱陽(yáng)離子交換（WCX）、強(qiáng)陰離子交換（SAX）、弱陰離子交換（WAX）四種。Proteomix SCX、WCX、SAX、WAX相分別是將磺酸基、羧基、季銨基和叔胺基化學(xué)鍵合在無(wú)孔PS/DVB樹(shù)脂親水涂層表面而形成的。

高的吸附容量

　　眾所周知，無(wú)孔樹(shù)脂具有最大傳質(zhì)和最小橫向擴(kuò)散的優(yōu)點(diǎn)，因此可使樣品得到快速、高效的分離。但是，由于無(wú)孔樹(shù)脂的比表面積低，這就導(dǎo)致了它的分離容量不高，從而限制了其在實(shí)踐中的許多應(yīng)用。賽分科技所開(kāi)發(fā)的合成技術(shù)使Proteomix離子交換樹(shù)脂在提高無(wú)孔樹(shù)脂交換容量方面取得了創(chuàng)新性突破。該技術(shù)可以使無(wú)孔樹(shù)脂的吸附容量達(dá)到與有孔樹(shù)脂相當(dāng)?shù)乃健膱D1中可以看到，3 µm粒徑的Proteomix SAX和WAX無(wú)孔離子交換樹(shù)脂的動(dòng)態(tài)吸附載量分別為35和26 mg/mL。圖2顯示3 µm粒徑的Proteomix SCX無(wú)孔樹(shù)脂的動(dòng)態(tài)吸附載量可高達(dá)53.5 mg/mL。

圖1. Proteomix陰離子交換樹(shù)脂(3 µm)動(dòng)態(tài)吸附載量測(cè)試

流動(dòng)相: 10 mM Tris/HCl, pH 8.0

流速: 0.25 mL/min

檢測(cè)波長(zhǎng): 280 nm

樣品: 3 mg/mL BSA

圖2. Proteomix陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(3 µm) 動(dòng)態(tài)吸附載量測(cè)試

流動(dòng)相: 10 mM Tris/HCl, pH 8.0

流速: 0.25 mL/min

檢測(cè)波長(zhǎng): 280 nm

樣品: 3 mg/mL溶菌酶

圖3. 細(xì)胞色素C（20 mg/mL）的吸附容量測(cè)試圖譜

流動(dòng)相: A, 20 mM PBS; B, A+1.0 M NaCl

梯度: 0-70% B (21 min)

流速: 0.35 mL/min

壓力: 2,800 psi

檢測(cè)波長(zhǎng): 280 nm

這種高吸附容量的離子交換樹(shù)脂可在高樣品負(fù)載量的情況下依然還具有高分離效率和高分辨率的特點(diǎn)。從圖6中可以看到，采用1.8µm粒徑的Proteomix SCX 無(wú)孔樹(shù)脂，當(dāng)樣品負(fù)載量高達(dá)200µg時(shí)色譜柱對(duì)細(xì)胞色素C仍具有滿意的分離效果。

高的分辨率和高選擇性

　　Proteomix無(wú)孔樹(shù)脂具有三個(gè)特點(diǎn)。首先，納米厚度的親水層完全消除了PS/DVB與生物樣品之間的非特異性相互作用。其次，無(wú)孔顆粒結(jié)構(gòu)使樣品的橫向擴(kuò)散達(dá)到最小并阻止了其向填料顆粒內(nèi)部的擴(kuò)散。第三，賽分公司的專有技術(shù)可以合成均勻致密的離子交換層。經(jīng)過(guò)獨(dú)具匠心設(shè)計(jì)的Proteomix SCX-NP、WCX-NP、SAX-NP和WAX-NP樹(shù)脂可為蛋白質(zhì)、寡核苷酸、糖類和多肽等提供最好的分辨率和分離效率。圖7是4.6mm I.D.?50mm Proteomix SCX-NP3 (3µm)短柱對(duì)三種蛋白混合物（核糖核酸酶A、細(xì)胞色素C和溶菌酶）的分離圖譜。溶菌酶在5cm長(zhǎng)的柱子上分離效率達(dá)到了100,000理論塔板數(shù)，這樣的分離效果是前所未有的。

圖4. Proteomix SCX-NP 柱對(duì)蛋白混合物的分離

圖5. Proteomix SCX-NP 柱(4.6 mm I.D.´50 mm, 3 µm)分離溶菌酶及其雜質(zhì)，分離條件同圖4。

獨(dú)特的Proteomix離子交換色譜柱對(duì)蛋白分離具有最高的選擇性。如上圖所示，溶菌酶的6個(gè)色譜峰在4.6 mm I.D.´50 mm Proteomix SCX-NP3 (3 µm)短柱上得到了很好的分離。如此高的選擇性遠(yuǎn)優(yōu)于其他公司同類產(chǎn)品。

圖6. 用Proteomix SAX-NP5柱分離卵清蛋白和BSA混合物

左圖是5 µm粒徑的Proteomix SAX-NP柱對(duì)卵清蛋白和BSA混合物的分離結(jié)果。從圖中可以明顯看到卵清蛋白及其雜質(zhì)和BSA及其二聚體的分離。

粒徑對(duì)分離效果的影響

　　填料粒徑越小，分離效率越高，分離速度越快。 Proteomix離子交換樹(shù)脂的粒徑具有多種規(guī)格，粒徑從1.0 µm到10 µm不等，可用于分析和半制備等不同用途。用1.7、3、5和10 µm四不同粒徑的弱陽(yáng)離子交換樹(shù)脂對(duì)三種蛋白分離得到的譜圖如圖7。從圖中可以看到，粒徑越小，分離效率和分辨率就越高。例如溶菌酶中一個(gè)標(biāo)號(hào)為N的雜質(zhì)，在用10 µm粒徑的WCX柱基本不能得到分離。在用5 µm粒徑的WCX柱上則基本達(dá)到基線分離。當(dāng)粒徑減小到3 µm時(shí)，可以獲得基線分離。而當(dāng)粒徑進(jìn)一步降低到1.7 µm時(shí)雜質(zhì)可得到完全分離。

圖7. 不同粒徑Proteomix WCX-NP 柱分離蛋白混合物

流動(dòng)相: A, 20 mM PBS; B, A+1.0 M NaCl

梯度: 0-100% B (20 min)

流速: 蛋白濃度(1.0 mg/mL) (1) 核糖核酸酶A (2) 細(xì)胞色素C (3) 溶菌酶

檢測(cè)波長(zhǎng): UV 280 nm

高的批間重現(xiàn)性

　　賽分科技的Proteomix離子交換柱具有極高的批間重現(xiàn)性，這得益于受到嚴(yán)格監(jiān)控的聚合物樹(shù)脂生產(chǎn)及表面化學(xué)修飾工藝。不同批次間的保留時(shí)間誤差在6%以內(nèi)。圖8是對(duì)三批3 µm粒徑的Proteomix SAX-NP柱分析結(jié)果的比較。

圖8. Proteomix SAX 柱的批間重現(xiàn)性

測(cè)試條件: SAX-NP3 柱(3 µm, 4.6 mm I.D.×50 mm); 20 mM Tris, pH 8.0, 0-0.3 M NaCl (15 min)

流速: 0.5 mL/min

檢測(cè)波長(zhǎng): 214 nm