引言

　　日常液相色譜分析實驗中，色譜柱的活化是保證實驗順利的關鍵步驟之一。不正確的活化方式可能造成柱效下降、固定相流失以及基線不穩(wěn)定等負面情況，影響分析結果的可靠性，還直接關系到色譜柱的壽命和儀器的使用性能。本期我們將利用賽分科技不同分離模式的色譜柱，為大家分享一些關于液相色譜柱活化方面的技巧，幫助大家獲得穩(wěn)定可靠的分析結果。

SEC色譜柱

　　活化方法

　　對于SEC色譜柱，我們推薦采用流動相以低流速沖洗色譜柱約10-20倍柱體積，再逐漸升高至預計的操作流速。

　　如果流動相中有機相比例超過20%，建議先用純水以低流速沖洗2-5倍柱體積，再進行轉換，以避免鹽析出。若選擇粘度/背壓更高的溶劑，如IPA，EtOH，則需要采用更低的流速。

　　流速的選擇通常與色譜柱尺寸規(guī)格和填料粒徑大小有關。一般來說，為確保最佳分離效果，色譜柱粒徑越小，活化時使用的流速會越低。同時，在線速度相同的情況下，色譜柱活化時使用的流速和色譜柱內徑呈正相關，即內徑越大，流速越高。因此，在確定活化參數時，流速的設置也非常重要。

表1.不同規(guī)格SEC柱活化參數

　　表1列舉了不同規(guī)格SEC柱活化的推薦流速，以供參考。在操作時，建議采用常規(guī)使用流速的1/5作為起始流速，每隔兩到三分鐘增加1/5流速。每次增加流速后，監(jiān)測其基線和壓力，待穩(wěn)定幾分鐘后，再逐漸提高流速。若加入如IPA等有機溶劑，流速增幅需要適當減小。

　　注意事項

　　1對于水相使用，用流動相沖洗色譜柱，同時逐漸將流速增加到操作流速，使色譜柱壓力平衡，并且基線穩(wěn)定。

　　2如果使用超過20%有機溶劑作為流動相，推薦在平衡時，采用低流速或者讓流動相在色譜柱中過夜保存。

表2.賽分科技SEC色譜柱部分展示

IEX色譜柱

　　活化方法

　　推薦用10-20倍柱體積的流動相進行沖洗以活化色譜柱。流速由0.1mL/min逐漸升至實驗所需條件，直至基線穩(wěn)定為止。

　　如果柱壓和基線波動較大，可能是氣泡進入了色譜柱中。這時需要斷開色譜柱，用較高流速沖洗2-5min，例如4.6×250mm的色譜柱可采用1.0mL/min流速。

　　如果流動相的類型或pH與色譜柱中緩沖液的pH值差異較大，建議將色譜柱先用新的流動相沖洗10倍柱體積。

表3.賽分科技IEX色譜柱部分展示