引言
多藥聯(lián)合制劑，是指在單一劑型中融合了兩種及以上不同藥物成分的創(chuàng)新模式。與單一藥物制劑不同，多藥聯(lián)合制劑通過(guò)各藥物間的協(xié)同效應(yīng)，在治療途徑中實(shí)現(xiàn)更高的療效。但與此同時(shí)，這種復(fù)合制劑也會(huì)導(dǎo)致藥物間異質(zhì)性相互作用，產(chǎn)生療效未知和免疫原性不確定的特殊雜質(zhì)，為藥物安全性和有效性帶來(lái)了新的挑戰(zhàn)。因此，探索并建立一套科學(xué)合理的評(píng)估體系，用以篩查由制劑引發(fā)的抗體異構(gòu)體現(xiàn)象，顯得尤為關(guān)鍵。
為解決這一問(wèn)題，2024年初，再生元公司采用賽分科技Zenix SEC-300色譜柱，開(kāi)發(fā)出混合模式體積排阻色譜(MM-SEC)分析方法，在異二聚體與總二聚體(同型與異型混合)的分離純化中具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。與其他分離模式相比，MM-SEC可以實(shí)現(xiàn)基線分離，異二聚體純度為67%，滿足分離純化要求(點(diǎn)擊文末閱讀原文查詢相關(guān)文章)。該方法在疫苗研發(fā)、藥物篩選評(píng)估等方面具有重大意義。
背景介紹
在生物制藥領(lǐng)域，再生元公司推出的卡西利維單抗和英德維單抗(Casirivimab＆imdevimab)作為典型的多藥聯(lián)合制劑藥物，可以通過(guò)結(jié)合病毒表面的三聚體刺突蛋白(S蛋白)，激活免疫系統(tǒng)，發(fā)揮至關(guān)重要的作用。這兩種抗體以1:1比例與IgG1抗體混合，形成了表位結(jié)合均衡的治療方案。
然而，多藥聯(lián)合制劑中產(chǎn)生的抗體異二聚體，其物理屬性與抗體藥物制品中原生存在的同源二聚體高度相似，這一特性為目標(biāo)物質(zhì)的精準(zhǔn)分離和純化帶來(lái)了巨大挑戰(zhàn)。賽分科技Zenix SEC-300色譜柱，其特有的表面修飾技術(shù)和優(yōu)異的分離性能，在保持高分辨率的同時(shí)可以實(shí)現(xiàn)異二聚體的基線分離和富集，確保最終產(chǎn)品滿足預(yù)期。
文章概述
對(duì)于多藥聯(lián)合制劑，其挑戰(zhàn)在于如何高效地從大量的單體和同源二聚體中提取出少量但至關(guān)重要的異二聚體。傳統(tǒng)的色譜分離模式各有優(yōu)勢(shì)，但單獨(dú)使用時(shí)可能無(wú)法達(dá)到理想的分離效果。因此，結(jié)合體積排阻色譜(Size Exclusion Chromatography, SEC)和疏水相互作用色譜(Hydrophobic Interaction Chromatography, HIC)技術(shù)特點(diǎn)的混合模式色譜(MM-SEC，后文簡(jiǎn)稱MMC)應(yīng)運(yùn)而生，成為解決這一難題的理想方案。
研究人員通過(guò)采用賽分科技Zenix SEC色譜柱開(kāi)發(fā)的MMC技術(shù)，有效實(shí)現(xiàn)了目標(biāo)產(chǎn)品中異二聚體的分離與富集，為中和抗體治療方法的質(zhì)量控制提供了有力支持，開(kāi)辟了新的分離純化途徑。
聚體富集
色譜柱：Zenix SEC-300(7.8×300mm,3μm,300Å)
流動(dòng)相：20mM磷酸鈉，10mM醋酸鈉，300mM硫酸鈉，150mM氯化鈉
流速：0.25mL/min
紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：UV280nm和UV215nm
進(jìn)樣量：10μg
整合色譜圖以確定每個(gè)峰的相對(duì)豐度，結(jié)果如下：
圖1.中和抗體二聚體SEC富集結(jié)果
圖1是將異源二聚體從痕量(＜0.05%)富集到＞55%純度的過(guò)程。如圖1所示，MMC模式下總二聚體樣品被分成4個(gè)特定的二聚體峰，根據(jù)不同疏水性，可實(shí)現(xiàn)基線分離。不同洗脫峰主要對(duì)應(yīng)于casirivimab同源二聚體、imdevimab同源二聚體及位于兩者之間的異二聚體。經(jīng)SEC分離純化后，異二聚體的純度提高至約67%，顯示出MMC技術(shù)在抗體異二聚體富集上的顯著成效。
圖2.富集組分穩(wěn)定性數(shù)據(jù)
圖2是每個(gè)樣品第0和第14天的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。富集的總二聚體和異二聚體在37℃下培育，并進(jìn)行MMC-UPLC分析。數(shù)據(jù)表明，隨著時(shí)間的推移，富集的組分傾向于解離成相應(yīng)的單體單抗。進(jìn)一步研究表明，這部分主要是兩種單抗樣品的同型二聚體，異二聚體的穩(wěn)定性與單個(gè)藥物成分中的同型二聚體類似。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論
綜上所述，在高鹽條件下，Zenix色譜柱能夠從總二聚體中分離異源二聚體。該實(shí)驗(yàn)為中和抗體治療方法的質(zhì)量控制提供了有力支持，不僅為進(jìn)一步了解抗體間的相互作用和結(jié)構(gòu)特性創(chuàng)造有利條件，也為整個(gè)生物制藥行業(yè)在復(fù)雜蛋白制品的純化和分析方面開(kāi)辟了新的途徑。
產(chǎn)品介紹
賽分科技SEC系列色譜柱，采用特有的表面修飾技術(shù)，分離速度快，分辨率高，通用性好，批次重現(xiàn)性強(qiáng)，適用于質(zhì)控QC放行，也是分析型SEC值得信賴的產(chǎn)品。
圖3.賽分科技SEC固定相表面修飾工藝
“-C”系列產(chǎn)品，采用賽分科技獨(dú)有的固定相修飾工藝（見(jiàn)圖2），硅膠表面鍵合一層“平躺”的單分子層，最大程度減少非特異性相互作用。“-C”系列產(chǎn)品適用于疏水性較強(qiáng)的樣品，可以減少有機(jī)相的使用，安全、環(huán)保，讓您的實(shí)驗(yàn)無(wú)后顧之憂。
延展閱讀
體積排阻色譜法適用于從小規(guī)模實(shí)驗(yàn)室研究到大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)的廣泛需求。賽分科技SEC系列產(chǎn)品具有柱容量大、操作簡(jiǎn)單、易于自動(dòng)化的特點(diǎn)，能夠穩(wěn)定、連續(xù)地處理大量樣品，滿足治療性蛋白在疫苗研制、臨床試驗(yàn)?zāi)酥辽虡I(yè)化生產(chǎn)中的高通量需求。
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《色譜柱保養(yǎng)小貼士：SEC/IEX色譜柱清潔指南》
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